Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:08 min. • July 8th, 2025
Comience con una placa que contenga neuronas motoras mielinizadas cultivadas, células nerviosas que controlan los músculos y miotubos, células musculares multinucleadas.
La neurona motora está conectada con el miotubo a través de una unión neuromuscular o NMJ, un sitio para la transmisión de señales.
Agregue cloruro de calcio al pozo.
Observe bajo un microscopio invertido para obtener imágenes en vivo y grabe una película.
Los iones de calcio ingresan a la neurona motora y desencadenan la liberación de acetilcolina, o ACh, un neurotransmisor excitador.
Estos neurotransmisores se unen a los receptores de ACh en los miotubos, lo que permite que los iones de sodio entren y desencadenen la contracción de los miotubos.
Graba la película. Luego, el software genera un gráfico de movimiento de tiempo codificado por colores para las contracciones del miotubo, donde el color rojo indica la velocidad más rápida y el azul representa la velocidad más lenta.
A continuación, introduzca un bloqueador neuromuscular que se une a los receptores de ACh. Esto previene la afluencia de sodio y restringe las contracciones del miotubo.
Vuelve a grabar la película. Una disminución en el color rojo indica una reducción en las contracciones del miotubo.
Para desencadenar las contracciones del miotubo, agregue 25 milimolares de cloruro de calcio a cada pocillo de células diferenciadas de la unión neuromuscular. Y dentro de uno o dos minutos de tratamiento, coloque la placa en la platina de un microscopio invertido. Usando microscopía de células vivas, grabe una película de la contracción del miotubo durante 20 segundos. Al final de la grabación, agregue 300 nanogramos por mililitro de curare al medio de cultivo y grabe la película durante otros 20 segundos, antes de abrir el archivo de película en un programa de software de análisis de vectores de movimiento apropiado para su análisis.