Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:47 min. • July 8th, 2025
Comience con un cerebro de ratón aislado en un tampón helado.
Transfiera el cerebro a una matriz cerebral, con el lado ventral hacia arriba.
Inserte hojas de afeitar para cortar en serie la parte anterior del cerebro.
Levante las rodajas manteniendo las cuchillas juntas, dejando atrás la parte posterior. Separe las hojas de afeitar y colóquelas sobre una superficie fría con las rodajas de cerebro hacia arriba.
Seleccione la división deseada y extraiga la región de interés.
Dividir y picar el tejido.
Transfiera el tejido picado a un tubo que contenga líquido cefalorraquídeo suplementado con el químico BS3.
Invierta y mezcle el tubo para romper el tejido en pedazos más pequeños, luego incube con rotación.
BS3, un químico impermeable a la membrana celular, reticula proteínas de la superficie neuronal como los receptores GABA, mientras que los receptores GABA internos permanecen inalterados.
Agregue glicina para apagar la reacción de reticulación.
La muestra está lista para la evaluación de los niveles de receptores GABA en superficie.
Para comenzar, extraiga rápidamente el cerebro del cráneo del ratón negro C57 6J sacrificado. Sumérjalo en una placa de Petri que contenga PBS helado durante 10 a 15 segundos. Coloque el cerebro frío en la matriz cerebral sobre hielo mirando hacia arriba con el lado ventral. Para cortar el cerebro coronalmente, inserte la primera hoja de afeitar a través del borde entre el bulbo olfatorio y el pedúnculo olfativo. Usando de tres a cuatro hojas de afeitar adicionales, corte en serie la parte anterior del cerebro coronalmente a intervalos de 1 milímetro.
Mantenga juntas las hojas de afeitar insertadas para levantar las rodajas coronales de la matriz cerebral, dejando atrás la parte posterior. Con fórceps, separe las hojas de afeitar entre sí y colóquelas sobre la superficie plana y fría con el corte de cerebro hacia arriba.
Para muestrear la corteza prefrontal, elija el segundo y tercer corte posterior al primer corte que contiene el pedúnculo olfativo. Con un punzón de tejido o fórceps, retire la región deseada. Coloque el pañuelo en la hoja de afeitar fría y divídala uniformemente en dos piezas. Use la punta fina de las pinzas para picar cada tejido en pedazos en la hoja de afeitar con múltiples movimientos verticales. Pinche el tubo etiquetado preenfriado que contiene líquido cefalorraquídeo artificial con 30 microlitros de solución BS3. Luego, transfiera inmediatamente los tejidos picados al tubo deseado.
Para la reacción de reticulación, invierta el tubo que contiene el tejido y la solución para romper los trozos de tejido en pedazos pequeños. Incube las muestras en el rotador de tubos a 4 grados Celsius durante 30 minutos a 2 horas, y registre la hora de inicio de la incubación BS3 para cada tubo. Luego, apague la reacción con 78 microlitros de glicina molar 1. Incube más durante 10 minutos a 4 grados centígrados con rotación constante y registre la hora de inicio y finalización del enfriamiento.