Microdisección de captura láser para aislar células de Purkinje de un tejido de cerebelo humano post-mortem

Tome un tejido cerebeloso humano postmortem que contenga las células de Purkinje, el gránulo y las capas de células moleculares.

Colóquelo en un soporte de muestra de criostato que contenga medios de inclusión parcialmente congelados.

Deje que el medio se congele por completo, asegurando el tejido.

Transfiera este conjunto al brazo de corte del criostato y permita que el tejido se aclimate a la temperatura del criostato.

Acerque el tejido a la cuchilla y recórtelo para exponer las capas de la corteza.

Coloque una placa antivuelco sobre la hoja y obtenga secciones cerebelosas.

Transfiera estas secciones a un portaobjetos de membrana.

Incubar en concentraciones crecientes de etanol para la fijación y deshidratación de tejidos.

Luego, incube en xileno.

Seque el portaobjetos y colóquelo en una platina de microscopio de captura láser UV.

Coloque la tapa de recolección sobre el tejido cerebeloso.

Microscópicamente, concéntrese en las células de Purkinje.

Usando el láser, capture y recolecte las células de Purkinje para su posterior análisis.

Primero, corte un pequeño trozo de tejido para seccionarlo, asegurándose de que la sección sea aproximadamente 95% de corteza cerebelosa. Regrese el