Procesamiento del cerebro de un ratón para su análisis posterior

Tome un cerebro de ratón recién cosechado y congélelo rápidamente en isopentano preenfriado para una rápida preservación de los tejidos.

A continuación, transfiera el cerebro, con la corteza hacia arriba, a una matriz cerebral congelada para mantener un ambiente frío durante el corte.

Permita que el cerebro se equilibre a la temperatura de la matriz. Alinéelo en la matriz a lo largo de los senos sagitales y transversales para asegurar secciones simétricas.

Inserte cuchillas frías en el cerebro, asegurando una alineación adecuada.

Luego, presiónelos uniformemente para obtener secciones cerebrales uniformes.

Retire las cuchillas con las secciones y colóquelas, con el lado rostral hacia arriba, en una placa de vidrio congelada.

Organice las secciones desde la orientación rostral hasta la caudal en el orden anatómico correcto. Ahora, sepáralos.

Usando una referencia cerebral adecuada, ubique y elimine la región de interés de la sección.

Transfiera el tejido extirpado a un vial preenfriado para su posterior análisis.

Después de extraer los cerebros de ratones adultos de tipo salvaje CD-1 sacrificados, congele rápidamente el tejido durante 60 segundos en nitrógeno líquido o isopentano preenfriado con hielo seco y guárdelo a -80 grados Celsius.

24 horas antes de diseccionar el tejido, coloque una matriz cerebral limpia en una pila de paquetes de congelador descongelados y coloque los lados de la matriz entre dos paquetes de congelador, asegurándose de dejar aproximadamente medio centímetro entre la parte inferior de las ranuras de la maquinilla de afeitar y la parte superior de los paquetes.

Instale una placa de vidrio congelado para la disección llenando una caja aislada con hielo hasta aproximadamente 5 centímetros de la parte superior. Luego, coloque una capa de hielo seco de 2,5 centímetros encima y cúbrala con láminas de plástico negro. Coloque un plato de vidrio encima del plástico y hielo seco alrededor de los bordes del plato.

Retire la matriz cerebral congelada del congelador e inserte la corteza cerebral hacia arriba en la matriz. Deje que el pañuelo se equilibre a la temperatura de la caja durante 10 minutos, manteniendo la tapa abierta durante este tiempo. Use fórceps fríos para ajustar la posición del cerebro en la matriz, de modo que el seno sagital y el seno transverso se alineen con los surcos perpendiculares del bloque.

Una vez que el cerebro esté en posición, coloque una hoja de afeitar fría cerca de su centro y presiónela aproximadamente 1 milímetro en el tejido. A continuación, coloque una cuchilla fría en cada extremo del cerebro y presione hasta el fondo en la matriz. Luego, comience a agregar cuchillas frías en el extremo rostral, colocándolas en las ranuras una a la vez y presionándolas suavemente 1 milímetro en el pañuelo. Continúe agregando cuchillas a intervalos de 1 milímetro, trabajando hacia el extremo caudal.

Cuando todas las cuchillas estén en su lugar, presione la parte superior con los dedos, la palma de la mano o un objeto contundente, y muévalas lentamente de lado a lado para moverlas a través del tejido. Una vez que las cuchillas hayan llegado al fondo de las ranuras, agarre cada lado del grupo de cuchillas y libérelas de la matriz balanceándolas hacia adelante y hacia atrás.

Después de liberar el grupo de cuchillas, colóquelas con el lado rostral hacia arriba en la placa de vidrio y coloque hielo seco al lado o encima de la pila para congelar aún más las muestras y facilitar la separación. Luego, coloque la pila con bordes afilados hacia abajo y separe las cuchillas moviendo la pila entre el pulgar y los dedos.

Alinee la sección de las placas de vidrio de rostral a caudal y separe el tejido de las cuchillas flexionándolas entre los dedos o separándolas con una segunda cuchilla fría. A veces, el tejido puede adherirse a ambos lados de una hoja y se debe tener cuidado para mantener la orientación rostral a caudal.

Antes de comenzar la disección, abra el Atlas del cerebro del ratón Allen u otra referencia y encuentre los puntos de referencia necesarios para identificar las regiones de interés. Use fórceps o cuchillas frías para voltear la sección y asegúrese de que la región de interés sea consistente en toda la sección.

Corte la sección con un bisturí o punzón limpio, empujando el metal suave pero firmemente en el tejido, balanceándolo hacia adelante y hacia atrás para hacer el corte. Después de cosechar la región de interés, colóquela en tubos de 1,5 mililitros preenfriados etiquetados y guárdelos a -80 grados centígrados.