JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociencia
0 vistas • 2:10 min • July 8th, 2025
Tome un disco intervertebral (IVD), una estructura similar a un cojín ubicada entre las vértebras, de una cola bovina.
Colóquelo verticalmente e inyecte TNF-α recombinante, una citocina proinflamatoria, en el núcleo pulposo (NP), el núcleo gelatinoso.
Retire la jeringa hasta la mitad y tire del émbolo para crear un vacío, evitando el reflujo α TNF. Luego, retire la jeringa.
Coloque el IVD en una cámara de biorreactor que contenga medios y aplique una carga de presión intensa diariamente.
El TNF-α se une a sus receptores en las células NP, desencadenando una cascada de señalización.
Esto activa las caspasas iniciadoras y ejecutoras, que degradan las proteínas celulares e inducen la apoptosis.
El TNF-α también activa el factor de transcripción NF-κB, que induce la expresión génica inflamatoria, lo que lleva a la liberación de enzimas que degradan la matriz extracelular del IVD.
Además, la intensa carga de presión induce estrés mecánico, degradando aún más el IVD.
Esto reduce la altura del IVD en comparación con los controles no tratados, estableciendo un modelo degenerativo y proinflamatorio de la enfermedad IVD en etapa temprana.
Después del primer ciclo de carga dinámica del primer día, coloque directamente los IVD en una placa de Petri en posición vertical y estabilícelos con una pinza. Inyectar TNF alfa recombinante con una aguja de insulina de calibre 30, lentamente a una velocidad de aproximadamente 70 microlitros por minuto en los IVD del grupo patológico. Después de inyectar, tire de la jeringa hasta la mitad hacia atrás y tire del émbolo para crear un vacío que evite que la solución inyectada tenga fugas. Luego, retire la jeringa completamente del IVD.