Obtención de una suspensión unicelular a partir de tejido cerebral de rata congelado

Descongele una sección de tejido cerebral de rata congelado.

Agregue tampón y pique el pañuelo. Luego, transfiéralo a un tubo que contenga tampón y mezcle.

Centrifugar la mezcla y desechar el sobrenadante.

Agregue una solución de enzima proteolítica al tejido y vuelva a suspenderla con una pipeta de gran diámetro.

Incube la mezcla para descomponer la matriz extracelular, aflojando las células neuronales.

Centrifugar la mezcla y desechar el sobrenadante.

Vuelva a suspender los fragmentos de tejido en un tampón enfriado y pipetee repetidamente para disociar las células.

Deje que los desechos y las células no disociadas se asienten, luego transfiera la suspensión de una sola célula a un nuevo tubo.

Transfiera las celdas a etanol helado y mezcle. Incubarlos para fijar y permeabilizar las células.

Centrifugar la suspensión y desechar el sobrenadante.

Vuelva a suspender las células neuronales en un tampón frío para su posterior análisis.

Para picar el tejido, deje que las muestras se descongelen en una placa de vidrio fría durante no más de 1 minuto antes de cubrir las muestras con una o dos gotas de solución tampón A. A continuación, sosteniendo una hoja de afeitar completamente vertica