Evaluación del estado de palmitoilación de las proteínas de la membrana celular a partir de tejido cerebral de ratón

Tome proteínas de la membrana celular del tejido cerebral del ratón.

Estas proteínas exhiben una modificación postraduccional con grupos palmitoilo, un ácido graso, unido a residuos de cisteína.

Agregue un tampón reductor e incube a alta temperatura para romper los enlaces entre las cisteínas no palmitoiladas, exponiéndolas.

Incubar con un reactivo de bloqueo que se une a las cisteínas expuestas, dejando solo las cisteínas palmitoiladas reactivas.

Transfiera la solución, mézclela con cloroformo, metanol y agua desionizada, centríquela para precipitar las proteínas y elimine las impurezas. A continuación, agregue metanol, centrifugue y deseche los contaminantes restantes.

Agregue un tampón, sonique para solubilizar el gránulo, luego centrifugue y elimine los materiales insolubles.

Aplique un reactivo de escisión para eliminar los grupos palmitoil de las cisteínas palmitoiladas.

Repita la precipitación de cloroformo-metanol y elimine las impurezas.

Incubar con un polímero que se une a las cisteínas desbloqueadas, ayudando a identificar las proteínas palmitoiladas.

Repita la precipitación de cloroformo-metanol y elimine los polímeros no unidos.

Vuelva a suspender el sedimento para un