Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:08 min. • July 8th, 2025
Tome una suspensión de células que secretan beta amiloide neurotóxica mezclada con un polímero biocompatible.
Conecte la jeringa con la suspensión a un dispositivo de fabricación de microperlas, luego empújela como una corriente de líquido continua.
Una frecuencia de vibración en el dispositivo divide la corriente en gotas uniformes del tamaño de una micra.
Estas gotas pasan a través de un campo electrostático y adquieren cargas uniformes para repelerse entre sí, evitando la fusión.
Luego, las gotas caen en un baño de gelificación que contiene iones de calcio. Los iones entrecruzan el polímero, encapsulando las células en microperlas esféricas.
Incube las perlas para completar la gelificación, luego recójalas en un filtro.
Invierta el filtro sobre un tubo, agregue un medio de cultivo para lavar las perlas en el tubo y transfiera la suspensión a un matraz que contenga el medio.
La matriz polimérica permite el acceso a nutrientes para apoyar la proliferación celular al tiempo que permite la liberación lenta de beta-amiloide, imitando la acumulación crónica observada en un cerebro enfermo de Alzheimer.
Para fabricar las microperlas, en una jeringa de 20 mililitros, cargue cinco mililitros de la suspensión de alginato celular y conecte una jeringa al encapsulador. Para iniciar el encapsulador, active el flujo, que empujará la suspensión de alginato celular a través del alimentador y se extruirá una corriente de gotas a través de la boquilla. Recoge el primer mililitro en el vaso de precipitados de residuos para evitar el chorro inicial no uniforme. Luego, continúe ejecutando los cuatro mililitros restantes, permitiendo que las gotas caigan en el baño de gelificación de cloruro de calcio.
Al entrar en contacto con el baño de gelificación, el alginato de las gotas se reticula instantáneamente con los iones de calcio en el baño de gelificación, formando microperlas esféricas. Después de un minuto, retire el vaso de gelificación de la plataforma magnética y deje reposar las microperlas durante cuatro minutos más sin agitación para completar su gelificación a temperatura ambiente. Para recuperar las microperlas, primero use un par de pinzas estériles para eliminar cualquier residuo o artefacto grande de alginato. Después de cortar el extremo de una pipeta de plástico, utilícela para transferir las microperlas del baño de gelificación a un filtro de malla de 74 micrómetros que se coloca sobre un vaso de precipitados de desechos.
Para garantizar el éxito, siempre cortamos el extremo de una pipeta de plástico para evitar dañar las microperlas y lo hacemos cada vez que transferimos las perlas de un recipiente a otro después de la encapsulación.
Invierta el filtro de malla sobre un tubo de centrífuga. Pipetea el medio de cultivo apropiado sobre él para lavar las perlas por el tubo y deja que se equilibren en ese medio durante cinco minutos. Luego, transfiéralos a un matraz previamente lleno con el medio apropiado para incubación y otros experimentos.