Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:08 min. • July 8th, 2025
Tomemos la pared del cuerpo de las larvas de Drosophila, que consiste en músculos inervados por neuronas motoras para formar uniones neuromusculares o NMJ.
La membrana muscular postsináptica en la NMJ contiene proteínas unidas a la membrana que interactúan, que están marcadas con anticuerpos primarios.
Agregue sondas de ensayo de ligadura de proximidad, o PLA, que contengan anticuerpos secundarios conjugados con oligonucleótidos monocatenarios. Incubar para que las sondas se unan a los anticuerpos primarios.
Lave las sondas sueltas.
Incubar con tampón de ligadura que contenga oligonucleótidos conectores y enzimas ligasas.
La proximidad de las proteínas que interactúan facilita la unión del conector a las sondas. Luego, la ligasa sella los espacios, creando ADN circular.
Lave los conectores no unidos.
Incubar con una solución de amplificación que contenga polimerasa, que amplifica el ADN circular a través de la amplificación del círculo rodante.
Las sondas detectoras marcadas con fluoróforo en la solución se recocen al ADN amplificado y, tras la excitación, producen una señal fluorescente.
Monte la pared del cuerpo en un portaobjetos para visualizar las interacciones proteína-proteí
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