Inmunohistoquímica de secciones de tejido cerebral de ratón para dirigirse a las neuronas de dopamina

Tome un portaobjetos recubierto de polímero con secciones de tejido cerebral de ratón que contengan neuronas de dopamina que expresen tirosina hidroxilasa, una enzima clave para la síntesis de dopamina.
Esboce las secciones con un bolígrafo hidrofóbico para garantizar una tinción uniforme.
Fije el tejido en una solución de acetona-metanol para preservar la morfología del tejido.
Enjuague con tampón que contenga detergente para permeabilizar las membranas celulares.
Incube con anticuerpos primarios dirigidos a la tirosina hidroxilasa en las neuronas de dopamina, luego lave para eliminar los anticuerpos no unidos.
Agregue anticuerpos secundarios marcados con colorante fluorescente, colorante nuclear e inhibidores de la ARNasa.
Durante la incubación, los anticuerpos secundarios se unen a los anticuerpos primarios, los colorantes nucleares marcan el núcleo y los inhibidores de la ARNasa inactivan las ARNasas.
Enjuague con tampón. Luego, deshidrate las secciones de tejido en concentraciones crecientes de etanol.
Incubar en xileno para limpiar el tejido.
Las secciones de tejido procesadas ahora están listas para la microdisección por captura láser, lo que permite una visualización y disección p