Modelado de lesiones repetitivas en la cabeza por conmoción cerebral en un modelo de ratón

Comience conectando la punta de impacto y la punta de la sonda a un dispositivo de impacto.

A continuación, asegure un mouse anestesiado en un marco estereotáxico.

Coloque la punta de impacto entre las suturas interfrontal y lambdoidea, alineada verticalmente con una línea horizontal imaginaria entre las orejas.

Ponga a cero los canales X e Y en el panel de control estereotáxico para evitar el desplazamiento del centro de impacto al cambiar las puntas.

Mueva manualmente la punta de la sonda al centro del impacto y bájela para tocar el sitio del impacto. Sujete un sensor de contacto a la cola del mouse.

Ponga a cero el canal Z, luego vuelva a colocar la punta de impacto hasta que X e Y sean cero y Z se lea menos cuatro.

Aplica el impacto a una velocidad específica.

Mida la apnea, el tiempo desde el impacto hasta la primera respiración del ratón, para determinar la gravedad de la lesión.

Permitir que el ratón se recupere.

Repite el impacto a intervalos especificados. Los impactos repetidos rompen los vasos sanguíneos en el cerebro, causando microhemorragias y desencadenando la activación de astrocitos, imitando una conmoción cerebral leve similar a la humana.

Comience conectando una punta de metal recubierta de caucho de silicona hecha a medida a un dispositivo de impacto estereotáxico electromagnético. Teniendo cuidado de que la parte inferior plana de la punta recubierta quede paralela a la superficie de la punta de la sonda del dispositivo de impacto. A continuación, coloque un ratón anestesiado en posición prona sobre una almohadilla térmica y confirme la falta de respuesta al pellizco del dedo del pie.

Luego, use una recortadora de pelo para afeitar completamente la cabeza y aplique ungüento en los ojos del animal. Cuando el animal esté listo, preestablezca la velocidad del dispositivo de impacto en 4 metros por segundo y el tiempo de permanencia en 240 milisegundos en la caja de control. Coloque una almohadilla térmica suave debajo del cuerpo del animal, para mantener la temperatura corporal cerca de 39 grados centígrados.

Luego, use las barras de los oídos de extremo romo para montar el mouse en el marco estereotáctico, en posición prona. Use el controlador z para bajar la punta de impacto, cerca de la cabeza del mouse. Mueva los controladores x e y, a mitad de camino de las coordenadas objetivo, por encima de la sutura sagital, para ajustar la punta de impacto plano de 9 milímetros de diámetro.

Cuidando que un borde de la punta de impacto, quede verticalmente paralelo a una línea horizontal imaginaria, dibujada entre las dos orejas. Para establecer correctamente la profundidad de impacto, primero, configure los canales x e y en el panel de control estereotáxico digital en cero, para asegurarse de que no haya un desplazamiento del centro de impacto después de cambiar las puntas.

Luego, mueva la punta de la sonda adicional al sitio de impacto del cerebro del ratón. Ajuste manualmente los controladores x e y para mover la punta de la sonda al centro del área de impacto y sujete un sensor de contacto a la cola. Utilice el controlador z para mover el impactador hacia abajo, hasta que la punta de la sonda toque la superficie del sitio del impacto, y establezca el canal z en el panel de control estereotáxico en cero.

Luego, use los controladores x e y para mover manualmente la punta de impacto hacia el área de impacto, hasta que los controladores x e y sean cero. Luego, mueva la unidad z hacia abajo hasta que el panel de control que muestra el controlador z esté en menos 4.00. Y mueva el interruptor de retracción en la caja de control para retraer el actuador.

Ahora, haga clic en el interruptor de impacto en la caja de control para desencadenar un impacto con una profundidad de deformación de 4 milímetros y use un temporizador para medir el tiempo desde el impacto hasta la primera respiración del mouse. Luego, transfiera al animal a una almohadilla tibia, con monitoreo hasta que se recupere por completo.