Detección de la proteína α-sinucleína asociada a enfermedades neurodegenerativas mediante ELISA

Comience con el tejido cerebral de un ratón transgénico que sobreexpresa α-sinucleína mutada, una proteína neuronal mal plegada asociada con enfermedades neurodegenerativas, sumergida en un tampón con alto contenido de sal.

Homogeneizar el tejido con un mortero grande, seguido de un mortero pequeño para alterar el tejido y liberar proteínas intracelulares, incluida la α-sinucleína.

Transfiera el homogeneizado a un tubo y centrifuge. Recoja el sobrenadante que contiene proteínas y dilúyalo con un tampón.

Agregue este sobrenadante a una microplaca recubierta de anticuerpos específicos de α-sinucleína pretratada con un agente bloqueador para evitar la unión inespecífica.

Incubar con agitación, permitiendo que se unan las α-sinucleína normales y mutadas.

Lave la placa, luego agregue anticuerpos de detección específicos para la α-sinucleína mutada e incube con agitación.

Lavar nuevamente y agregar anticuerpos ligados a enzimas, seguido de incubación bajo agitación.

Agregue sustrato e incube en la oscuridad bajo agitación. El sustrato reacciona con la enzima para producir un cambio de color.

Detenga la reacción con un ácido y mida la absorbancia para cuantificar la α-sinucleína mutada.

Para prep