Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
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Comience con un ratón anestesiado con una arteria carótida común expuesta o CCA.
La CCA se bifurca en la arteria carótida externa, o ECA, que suministra sangre a la cara, y la arteria carótida interna, o ICA, que suministra sangre al cerebro.
Primero, coloque una sutura alrededor de la ECA y apriétela.
A continuación, añada una sutura apretada en el CCA por debajo del lugar de la inyección para bloquear el flujo sanguíneo.
Inserte una tira de papel húmedo debajo del CCA como soporte.
Coloque un nudo suelto sobre el lugar de la inyección, luego inyecte las células cancerosas en el CCA.
Debido a la ECA suturada, las células viajan a la ACI para llegar al cerebro.
Después de la inyección, retire la aguja y apriete el nudo distal del CCA para evitar el reflujo.
Finalmente, recorte las suturas, retire la tira, enjuague con solución salina y cierre la herida.
Con el tiempo, las células cancerosas migradas se propagan y desarrollan tumores en el cerebro.
Coloque pinzas finas debajo de la arteria carótida externa y pase una sutura de seda 5-0 debajo de la arteria. Anude y apriete la sutura y corte la línea sobrante. Coloque fórceps finos debajo de la arteria carótida común y pase una sutura de seda 5-0 debajo de la arteria.
Haga un nudo y apriete la sutura en una posición proximal al sitio de inyección propuesto. Corta el exceso de sutura, dejando unos 10 milímetros de la línea. Corte y humedezca una tira de toallitas desechables con poca pelusa de aproximadamente 10 por 5 milímetros.
Dobla la tira y colócala debajo de la arteria carótida en el sitio propuesto para la inyección. Esto sostendrá el vaso durante la inyección. En la arteria carótida común rostral al sitio de inyección propuesto, coloque una tercera ligadura con un nudo suelto. Esto se aprieta solo después de la inyección.
Agite suavemente la suspensión celular y extraiga 200 microlitros de suspensión celular en una jeringa de insulina con una aguja de calibre 31. Cargue la jeringa en el controlador de jeringa conectado a un pedal de activación.
Coloque una cánula fina con una aguja de calibre 31 en la jeringa y prepare la línea. Comprobar si la arteria carótida está bien posicionada y presurizada. Usando dos pinzas en ángulo fino, una tensando suavemente el extremo de la primera ligadura y la otra sosteniendo la aguja de calibre 31, inserte lentamente la aguja con el bisel hacia arriba en la luz del vaso sanguíneo, teniendo cuidado de no perforarlo.
Inyecte lentamente 100 microlitros de suspensión celular preparada anteriormente en la arteria carótida común a 10 microlitros por segundo. Esto entregará 2.5 veces 10 a las quintas células en el vaso sanguíneo. La inyección exitosa se puede visualizar a través de la limpieza de sangre del vaso sanguíneo carotídeo.
Levante y apriete suavemente la ligadura suelta inmediatamente después de retirar la aguja para evitar el reflujo y el sangrado. Recorte el exceso de suturas y retire el trozo de toallitas desechables humedecidas y con poca pelusa.
Con una pipeta P200, enjuague la cavidad quirúrgica dos veces con 150 a 200 microlitros de agua estéril o solución salina. Después de verificar si hay hemorragias, vuelva a colocar el tejido blando, las glándulas salivales y la piel sobre la arteria carótida y la tráquea. Cierre la capa de piel de la incisión con un portaagujas de sutura, fórceps y una sutura de monofilamento 6-0 absorbible o no absorbible en un patrón continuo.