Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:47 min. • April 28th, 2025
Comience con péptidos derivados de gránulos de neuromelanina (NMG) aislados del tejido cerebral humano postmortem.
NMGs, que se encuentran en las neuronas productoras de dopamina, contienen pigmento de neuromelanina, proteínas y lípidos.
Tome una columna de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) que contenga una fase estacionaria a base de sílice funcionalizada con ligandos hidrofóbicos.
Carga los péptidos en la columna.
Los péptidos hidrófobos se unen más fuertemente a la columna que los hidrófilos.
Pase un búfer de elución a través de la columna.
Los péptidos menos hidrofóbicos eluyen primero, mientras que los más hidrófobos eluyen después.
Los péptidos eluidos ingresan a la fuente de ionización por electropulverización del espectrómetro de masas, donde se ionizan en iones peptídicos cargados.
Los péptidos ionizados ingresan al analizador de masas, donde se separan en función de sus relaciones masa-carga.
Un ion peptídico seleccionado se dirige a la celda de colisión y se fragmenta en iones más pequeños, cuyas relaciones masa-carga se miden nuevamente.
Finalmente, los datos se comparan con una base de datos de referencia para identificar las proteínas presentes en la muestra de NM
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