Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:01 min. • April 28th, 2025
Comience con una placa de pocillos múltiples de fondo plano recubierta con una matriz de membrana basal, que contiene polímero extracelular y proteínas de adhesión que imitan la matriz del microambiente tumoral.
Introduzca un medio que contenga una neuroesfera de células de glioma derivadas de un tumor cerebral pediátrico, asegurándose de que esté posicionado en el centro del pocillo.
La matriz promueve la unión de la neuroesfera al pozo.
Agregue un reactivo supresor de fondo para minimizar la fluorescencia no específica.
A continuación, introduzca anticuerpos anti-CD44 conjugados con fluoróforos verdes.
Transfiera la placa a un sistema de imágenes de células vivas alojado dentro de una incubadora que mantiene las condiciones fisiológicas de la célula.
Con el tiempo, las células de glioma expresan la proteína de adhesión celular CD44, que interactúa con las proteínas de adhesión.
Esto activa la vía de señalización celular y facilita la migración celular desde la neurosfera.
Los anticuerpos anti-CD44 conjugados con fluoróforos se unen a los CD44 expresados en las células del glioma, haciéndolas fluorescentes.
La aparición de células fluorescentes verdes que se alejan de la neuroesfera confir
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