Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:38 min. • April 28th, 2025
Tome esferoides tumorales neuroendocrinos del intestino delgado en un tubo.
Agregue una solución fijadora para preservar las celdas.
Para lavar, centrifugar y reemplazar el fijador con tampón.
Centrifugar y desechar el sobrenadante para eliminar cualquier fijador restante.
Agregue un tampón que contenga detergente y un agente bloqueador para permeabilizar las membranas celulares y evitar la unión de anticuerpos no específicos.
Lavar con tampón para eliminar el exceso de detergente y agente bloqueador.
Incubar con anticuerpos primarios, que se unen a la proteína diana específica de la célula neuroendocrina.
Lavar con tampón para eliminar los anticuerpos no unidos.
Agregue anticuerpos secundarios marcados con fluoróforos que se unan a los anticuerpos primarios.
Enjuague con tampón para eliminar el exceso de anticuerpos.
Agregue un medio de montaje que contenga un tinte para teñir el núcleo.
Transfiera los esferoides a una diapositiva y móntelos con un cubreobjetos.
Utilice un microscopio de fluorescencia para visualizar las células neuroendocrinas del esferoide que expresan proteínas específicas.
Arregle los organoides agregando 500 microlitros de paraformaldehído e incubándolos durante 15 minu
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