Desarrollo de un modelo de presión translaminar utilizando un sistema autónomo translaminar

Comienza con un ojo humano. Retire la vaina para exponer el nervio óptico.

Divide el ojo y luego elimina el humor vítreo del segmento posterior.

Recorta la esclerótica, la capa externa y extiende la retina que contiene las células ganglionares de la retina conectadas al nervio óptico a través de la lámina cribosa, una estructura similar a una malla.

Coloque este segmento sobre la cúpula de la cámara inferior del sistema autónomo translaminar, con el nervio óptico hacia arriba y luego séllelo.

Conecte el tubo y fluya un medio de perfusión.

El movimiento del líquido genera presión dentro de la copa ocular, asemejándose a la presión intraocular.

A continuación, coloque la cámara superior que cubre el nervio óptico y séllela.

Conecte el tubo para que fluya el medio alrededor del nervio, asemejándose a la presión intracraneal.

La diferencia de presión entre estas cámaras establece una presión translaminar a través de la lámina cribosa, lo que permite el estudio de la transmisión de señales de células ganglionares de la retina al nervio óptico bajo esta condición de presión.

Para preparar una muestra de globo ocular humano completo, retire la vaina del nervio óptico y retire el humor vítreo del segmento posterior. Para garantizar un buen ajuste en la cúpula redonda de la cámara de PIO, recorte la esclerótica adicional del segmento posterior según sea necesario y use fórceps para asegurarse de que la retina se distribuya uniformemente sobre la parte posterior humana del segmento. Luego coloque el segmento en la cámara IOP del TAS sobre la cúpula redonda, con el nervio óptico hacia arriba, y use una junta tórica de resina epoxi y 4 tornillos para sellar el segmento posterior.

Para configurar la cámara IOP, inserte el tubo en los puertos de entrada y salida de la cámara e inserte la jeringa de entrada IOP en el puerto de entrada. Inserte la configuración de jeringa de salida IOP vacía en el puerto de salida y use el método push-pull para infundir lentamente el medio de perfusión en el puerto de entrada para llenar la copa ocular posterior mientras simultáneamente extrae lentamente el medio de perfusión a través de la jeringa de salida para eliminar cualquier burbuja de aire de las líneas. Una vez que los tubos de entrada y salida estén vacíos de burbujas de aire, detenga la infusión y bloquee las llaves de paso en la posición de apagado.

Retire la jeringa del conjunto del filtro de importación IOP y vuelva a llenar la jeringa con 30 mililitros adicionales de medio. Luego vuelva a insertar la configuración de la jeringa en el conjunto del filtro. Para configurar la cámara ICP, coloque la cámara sobre la parte posterior del segmento posterior, teniendo cuidado de que el nervio óptico esté dentro de la cámara superior, y selle la cámara superior con 4 tornillos.

Luego inserte el tubo en los puertos de entrada y salida de la cámara ICP: la jeringa de entrada ICP en el puerto de entrada y la jeringa de salida ICP vacía en el puerto de salida para enjuagar el sistema con medio, como se acaba de demostrar.