Ensayo de fagocitosis de células vivas de células similares a la microglía utilizando sinaptosomas humanos

Tome una placa de pocillos múltiples que contenga células similares a la microglía que exhiban actividad fagocítica.

Incubar con una tinción nuclear para etiquetar los núcleos.

Agregue un inhibidor de polimerización de actina al pocillo de control negativo.

Durante la incubación, el inhibidor se une a los filamentos de actina, inhibiendo la polimerización de la actina y la fagocitosis.

Mantenga la placa a bajas temperaturas y agregue sinaptosomas humanos marcados con colorante sensible al pH: fragmentos aislados de terminales sinápticos neuronales.

Centrifugar la placa a bajas temperaturas para promover las interacciones célula-sinaptosoma, pero evitar la absorción prematura.

Transfiera la placa a un sistema de imágenes de células vivas.

En el pozo de prueba, los sinaptosomas se fagocitan y se fusionan con los lisosomas formando fagolisosomas. El ambiente ácido lisosomal activa el colorante, lo que da como resultado su fluorescencia.

Con el tiempo, en el pozo de prueba, se engullen más sinaptosomas causando un mayor aumento de la fluorescencia.

Sin embargo, en el pozo de control negativo, se inhibe la polimerización de la actina, lo que impide la captación de sinaptosomas. La mínima fluores