Inducción de una lesión cerebral traumática leve en un modelo de ratón

Asegura un ratón anestesiado y preparado en un marco estereotáxico con el cráneo expuesto.

Identifica los puntos de referencia del cráneo. A continuación, coloque un aparato de soporte para la cabeza debajo de la cabeza del animal e ínflelo para evitar daños en los oídos.

Alinee un impactador electromagnético guiado estereotáxicamente sobre la cabeza.

Restablezca las coordenadas estereotáxicas para alinear con precisión la sonda del impactador sobre el objetivo. Coloque un sensor de contacto en la oreja del animal.

Una vez que la sonda toque el cráneo, retírelo. Establezca la profundidad de impacto deseada e inicie el impacto con los parámetros apropiados.

La sonda administra una fuerza controlada al cráneo, induciendo el estiramiento axonal y el cizallamiento en las neuronas corticales, lo que conduce a una lesión cerebral traumática leve.

Mide el tiempo de enderezamiento del animal, el tiempo necesario para recuperar la posición normal del cuerpo después de la lesión.

Evalúa el ratón en busca de fracturas de cráneo visibles.

A continuación, retira el ratón del encuadre, cierra la incisión y aplica antibióticos.

Permitir que el ratón se recupere.

Asegure el mouse en el marco estereotáxico con resina acetálica liviana, barras para los oídos de punta cónica, una barra de mordida y una máscara de anestesia para ratones. Luego, controle cuidadosamente la respiración del ratón para asegurar la profundidad de la anestesia. Aplique lubricante ocular estéril en los ojos para evitar la sequedad de la córnea. Esterilice el cuero cabelludo con hisopos de povidona yodada.

Después de asegurar la profundidad de la anestesia, haga una incisión en la línea media del cuero cabelludo de aproximadamente 1 centímetro entre los ojos y el cuello con un bisturí, exponiendo el cráneo. Deje que el cráneo se seque durante 1 a 2 minutos, luego, identifique el bregma y la lambda. A continuación, coloque el aparato de soporte para la cabeza debajo de la cabeza e infle el bulbo con agua hasta que presione contra la parte inferior de la cabeza del ratón pero sin levantar la cabeza de la barra de mordida.

Mueve el impactador a su lugar sobre la cabeza del ratón. Extienda el impactador colocando el interruptor de palanca de extensión-retracción en extensión. Luego, alinee el impactador hasta que esté centrado sobre el bregma. Restablezca las coordenadas x e y estereotáxicas digitales en el lector estereotáxico a 0. Luego, alinee la sonda sobre la ubicación del impacto moviendo la sonda desde el bregma hasta las coordenadas objetivo como lateral medial a 0 milímetros y posterior anterior a menos 1,6 milímetros.

Haga clic en el sensor de contacto en la oreja del mouse. Baje lentamente la punta de la sonda con la sonda extendida hasta que se haga el primer contacto con la superficie. Deténgase en el pitido. A continuación, restablezca las coordenadas z estereotáxicas digitales en el lector estereotáxico a 0.

Inspeccione cuidadosamente si la punta está al ras del cráneo. Luego, retraiga el impactador colocando el interruptor de palanca en la caja de control en la posición de retracción. La punta se retira y no tiene más contacto con la cabeza hasta el momento del impacto. Establezca la profundidad del impacto ajustando la profundidad ventral dorsal a menos 1,2 milímetros. Controle cuidadosamente la respiración del ratón para asegurar la profundidad de la anestesia y ajuste el nivel de gas según sea necesario.

Inducir el impacto presionando el interruptor de palanca derecho para impactar. La punta de la sonda baja a la velocidad mostrada, permanece hacia abajo durante el tiempo de permanencia establecido y se retrae. Inicie el temporizador inmediatamente después de que se administre la lesión craneal cercana o el impacto de CHI para registrar los tiempos de enderezamiento. El tiempo promedio del reflejo de adrizamiento es de 5 a 15 minutos.

Evalúe el ratón en busca de fracturas de cráneo visibles, hemorragias y apnea. Retire el mouse del marco estereotáxico. Cierre el cuero cabelludo grapando la piel. Luego aplique un ungüento antibiótico triple con un aplicador estéril con punta de algodón en la incisión cerrada. Regrese el mouse a una jaula de retención limpia para su recuperación.