Inmunomarcaje de proteínas de membrana neuronal en un espécimen de tejido cerebral de ratón fracturado por congelación
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:19 min. • April 28th, 2025
Tome una muestra fracturada por congelación de tejido cerebral de ratón en un tampón.
La muestra está recubierta con platino para mejorar los detalles de la superficie y con carbono para la estabilidad estructural.
Transferir la muestra a un vial con un tampón de digestión que contenga detergente.
Incubar para facilitar la descomposición del tejido, dejando intactas la membrana y las proteínas incrustadas en el recubrimiento.
Wash con buffer para eliminar los residuos.
Agregue una solución de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos no específicos.
Introducir anticuerpos primarios específicos para la proteína de membrana neuronal diana.
Lavar con tampón para eliminar los anticuerpos no unidos.
Incubar con anticuerpos secundarios conjugados con oro que se unen a los anticuerpos primarios.
Lavar con tampón para eliminar el exceso de anticuerpos.
Enjuague con agua para evitar artefactos de residuos de sal durante la microscopía.
Monte la muestra en un microscopio electrónico de transmisión o en una rejilla TEM.
Debajo del TEM, visualice la proteína de membrana neuronal diana identificada por partículas de oro, que aparecen como puntos negros.
Para la digestión SDS, transfiera una réplica a u
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