Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 7:03 min. • April 28th, 2025
Tome las células de la neuroesfera en un tampón que contenga detergentes, calcio e inhibidores de la proteasa.
El detergente permeabiliza las células, mientras que el inhibidor inactiva las proteasas para preservar la proteína diana unida a la cromatina.
Agregue nucleasa e incube. La nucleasa usa calcio para digerir la cromatina.
Agregue un tampón que contenga EDTA que quele el calcio, inactivando la nucleasa.
Agregue tampón de lisis para lisar las células, liberando la cromatina.
Centrifugar y recoger el sobrenadante.
Agregue anticuerpos específicos a la proteína diana e incube con rotación. Centrifugar y eliminar el sobrenadante.
Introducir perlas magnéticas dirigidas al anticuerpo e incubar con rotación.
Agregue tampón de lisis para separar el ADN unido no específicamente.
Capture magnéticamente las perlas y elimine el sobrenadante.
Agregue un tampón con alto contenido de sal para separar las proteínas unidas de forma no específica.
Capture magnéticamente las perlas y elimine el sobrenadante.
Agregue un tampón de estabilización, capture magnéticamente las perlas y elimine los contaminantes.
Vuelva a suspender en un tampón de proteinasa-K para digerir las proteínas, liberando el ADN.
Una vez
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