Tinción por inmunofluorescencia de tejido fibrovascular enfermo derivado del paciente incluido en gel

Tome tejido fibrovascular enfermo rehidratado con gel de fibrina incrustado, fijado y permeabilizado derivado del paciente. Este tejido contiene estructuras neovasculares irregulares con células endoteliales y pericitos.

Trate el tejido con una solución bloqueadora para evitar la unión de anticuerpos no específicos.

Incubar con anticuerpos primarios dirigidos a proteínas de superficie en células endoteliales y pericitos.

Enjuague con tampón para eliminar los anticuerpos no unidos, luego incube en tampón.

Después del lavado con tampón, incube con anticuerpos secundarios conjugados con colorantes fluorescentes para unirse a los anticuerpos primarios.

Lavar con tampón para eliminar el exceso de anticuerpos e incubar en tampón.

Después del lavado con tampón, agregue un colorante nuclear para teñir los núcleos celulares. Enjuague con tampón y agua desionizada para eliminar el tinte no unido.

Transfiera el tejido a un portaobjetos de microscopio.

Aplique los medios de montaje y selle con un cubreobjetos que contenga medios de montaje de endurecimiento rápido.

Después de secar al aire, guarde el portaobjetos a baja temperatura. Luego, obtenga imágenes del tejido bajo un microscopio de epifluoresce