Generación de una oclusión de la arteria cerebral media en una cría de rata para inducir isquemia cerebral local

Comience con un cachorro de rata anestesiado asegurado en una almohadilla térmica.

Esterilizar la zona cervical alternativamente con etanol y povidona yodada. Administre anestesia local en el sitio de la incisión.

Hacer una incisión cervical, exponiendo la arteria carótida común.

Coloque retractores para garantizar un acceso claro.

Identifique la arteria carótida interna o ICA y elimine el tejido circundante.

Ate una ligadura alrededor de la base del ICA y retírela para detener temporalmente el flujo sanguíneo.

Coloque una segunda ligadura suelta en el ICA.

Hacer una incisión entre las ligaduras.

Tome una sutura de oclusión de nailon recubierta de silicona e insértela a través de la incisión hasta que llegue a la arteria cerebral media o MCA.

Esto bloquea el flujo sanguíneo a la MCA, induciendo isquemia local en el cerebro.

Ate la ligadura alrededor de la sutura de oclusión para asegurarla.

Cierre el sitio de la incisión. Deje que el cachorro se recupere antes de realizar más estudios.

Después de anestesiar al cachorro con isoflurano inhalado de acuerdo con los protocolos aprobados, asegúrese de que no haya respuesta a un pellizco en el pie. Mantenga la temperatura de la superficie corporal con el uso de una almohadilla térmica debajo de la etapa quirúrgica. Asegure al animal en posición supina con cinta adhesiva en las regiones de los hombros.

Use hisopos de algodón estériles para frotar el área cervical anterior con etanol al 70%, seguido de un hisopo de solución de povidona yodada. A continuación, infiltre localmente bupivacaína al 0,25% en el sitio de incisión planificado. Luego, mientras trabaja a través de un estereoscopio, haga una incisión cervical anterior de 5 a 7 milímetros en la línea media para exponer la arteria carótida común.

Coloque de 2 a 4 retractores para mantener la cavidad abierta y la arteria expuesta. A continuación, ubique la arteria carótida interna, la arteria occipital y la arteria carótida externa. Retire el tejido conectivo y la grasa de las arterias para obtener una visión clara.

Después de cortar 1,5 centímetros de hilo de sutura trenzado de seda 6-0. Destrenza la sutura, sacando hebras simples. Asegúrese de que las hebras individuales estén limpias y no deshilachadas.

Mientras sostiene la hebra de sutura con pinzas de 45 grados, barra las pinzas en un arco debajo de la ACI para que las puntas emerjan entre la ACI y la OA. A continuación, agarre el extremo de la hebra de sutura y tire de él para que el extremo sea de fácil acceso. Suelte el mechón de las pinzas y retire las pinzas de debajo de la ACI, invirtiendo el movimiento anterior.

Ate una ligadura temporal alrededor del ICA en la base más cercana a donde se separa del CCA. Retraiga con cuidado el ICA lateralmente, luego use un clip para asegurar el mechón retráctil al exceso de piel cerca de la región axilar en el lado opuesto a la incisión. Asegúrese de que la hebra retráctil esté lo suficientemente tensa como para detener el flujo sanguíneo antes de continuar con el siguiente paso.

La arteria debe estar plana y pálida. Use una pinza de 45 grados para agarrar otra hebra de sutura sin trenzar y enróllela debajo y alrededor de la ICA como antes. Coloque esta hebra lateral a la hebra de retracción.

Luego corte una arteritomía de 0,2 milímetros, a medio camino entre las ligaduras atadas y desatadas, más cerca de la ligadura atada. Ahora, usando una regla métrica, mida 10 milímetros de sutura de nailon recubierta de silicona como sutura de oclusión. Corte la sutura con un margen adicional de 2 a 3 milímetros para retirarla durante la reperfusión.

Sostenga la sutura de oclusión con pinzas de 45 grados y use pinzas rectas para crear una curva, marcando el punto de parada del avance. Introduzca la sutura oclusiva en la arteriotomía, apuntándola paralela al ACE y hacia la cabeza. Avance suavemente la sutura hasta llegar a la curva. Luego use la hebra colocada lateralmente a la hebra de retracción para atar una ligadura temporal para asegurar la sutura de oclusión. Retire el clip retractor. Luego recorta las hebras de ambas ligaduras temporales, dejando la hebra que se usará para quitar el nudo más larga que la hebra utilizada para apretarlo. Retire los retractores. Y cierre la cavidad con seda trenzada 6-0 para crear tres o cuatro suturas interrumpidas.

Retire al cachorro de la anestesia y colóquelo sobre una almohadilla térmica en el aire ambiente. Monitoree al cachorro hasta que haya recuperado la conciencia suficiente para mantener la decúbito esternal, y asegúrese de que esté completamente recuperado antes de devolverlo a la madre.