Imágenes de alta resolución de los receptores de neurotransmisores en las sinapsis de la retina

Tome una sección de retina de ratón en una cuadrícula de microscopía electrónica. La sección contiene células ganglionares de la retina, o RGC, unidas sinápticamente a las células bipolares. Las

células bipolares presinápticas contienen vesículas de neurotransmisores dispuestas en una estructura de cinta cerca de la membrana sináptica.

Las

RGC postsinápticas muestran receptores de neurotransmisores agrupados en su membrana. Estas células están marcadas con la subunidad B o CTB de la toxina del cólera.

Lavar con un tampón para mantener el pH.

Incubar con un tampón de bloqueo para enmascarar los sitios de unión no específicos.

Incubar con anticuerpos primarios dirigidos a los receptores de neurotransmisores y CTB.

Lavar con un tampón para eliminar los anticuerpos no unidos y mantener el pH.

Incubar con anticuerpos secundarios conjugados con nanopartículas de oro de diferentes tamaños, que se unen a los anticuerpos primarios, marcando las moléculas diana.

Retire los anticuerpos no unidos y luego seque la muestra al aire.

Aplique metales pesados que se unan a las macromoléculas, mejorando el contraste.

Usando microscopía electrónica, identifique las RGC usando los CTB marcados y localice los