Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:52 min. • April 28th, 2025
Comience con una placa de pocillos múltiples que contenga células de mamíferos recombinantes adherentes en una solución de estimulación suplementada con luciferina, un sustrato luminiscente.
Incubate para permitir la entrada de luciferina a la célula.
Estas células expresan receptores odorantes unidos a la membrana junto con proteínas G olfativas y proteínas transportadoras de receptores.
Además, las células expresan proteínas Glosensor citoplasmáticas, proteínas luminiscentes sensibles al AMP cíclico.
Agregue una solución odorante vaporizable en el espacio entre los pocillos y coloque la placa dentro de un instrumento luminómetro preequilibrado con el mismo odorante.
Iniciar la medición de luminiscencia.
Las moléculas odorantes se unen a los receptores odorantes de las células, activando la proteína G acoplada y disociando la subunidad α de la proteína G, o Gα.
La subunidad Gα disociada se une a la enzima adenilato ciclasa incrustada en la membrana, activándola. La enzima activada convierte los ATP en AMP cíclicos.
Estos AMP cíclicos se unen a las proteínas glosensoras, alterando su conformación y permitiendo la unión de la luciferina.
Esta interacción produce luminiscencia, confirmand
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