Modelado de la regeneración sensorial de axones en una rata mediante la inyección de ganglios de la raíz dorsal y la lesión por aplastamiento de la raíz dorsal

Comience con una rata anestesiada.

Haga una incisión en la línea media de la piel entre las vértebras cervicales C2 y T2 torácicas.

A continuación, haga una incisión a lo largo de la línea media del tejido fibroso blanco y retraiga la primera capa muscular.

Diseccionar el tejido membranoso delgado en la línea media de la segunda capa muscular, luego retraer los músculos longitudinales estriados.

Finalmente, haga una incisión en la tercera capa muscular para exponer la columna vertebral.

Retire la lámina y el pedículo que recubren las vértebras C4 a T1 izquierdas para revelar los ganglios de la raíz dorsal C5 a C8 o DRG.

Inyecte una suspensión viral adenoasociada recombinante en los DRG.

El virus codifica una proteína promotora del crecimiento que ayuda en la regeneración axonal.

Con fórceps, aplaste las raíces dorsales C5 a C8 para cortar las conexiones axonales del DRG a la médula espinal, creando una lesión axonal controlada.

El modelo está listo para estudiar la regeneración axonal mediada por virus.

Comience la cirugía ubicando las apófisis espinosas C2 y T2 prominentes sobre la piel. Luego use un bisturí número 10 para hacer una incisión en la piel entre las apófisis espinosas C2 y T2. Una vez que se abre la piel, debe ser visible una línea media de tejido fibroso blanco en la primera capa de músculo, que tiene una textura gelatinosa.

Haga una incisión de tamaño similar en la primera capa de músculo a lo largo de la línea media blanca. No vaya más allá de la prominente apófisis espinosa T2, ya que hay un vaso sanguíneo importante ubicado cerca de allí. Retraiga la primera capa de músculo usando dos retractores, uno colocado rostralmente y otro caudalmente.

La segunda capa de músculo con apariencia estriada ahora debería ser visible. Localice la línea media de la segunda capa de músculo, donde se pueden observar dos músculos longitudinales, conectados por un tejido membranoso delgado. Luego use un par de microtijeras para diseccionar el tejido membranoso y separar los dos músculos longitudinales.

Ajuste los retractores para exponer la tercera capa de hocico delgado que cubre la columna vertebral. Las apófisis espinosas se pueden sentir tocando ligeramente con un par de fórceps sobre la tercera capa de músculo. Use microtijeras para hacer una pequeña incisión en la tercera capa del músculo. Y raspe suavemente el músculo del hueso con una cureta o bisturí de manera lateral para exponer claramente las vértebras.

Para exponer los DRG C5 a C8 izquierdos, use un par de rongeurs finos para realizar una hemilaminectomía izquierda en las vértebras C4 a T1 extirpando cuidadosamente parte de la lámina y el pedículo. Una vez que se haya expuesto suficiente DRG para la inyección, prepare la jeringa colocando la jeringa de microlitros llena de virus equipada con una aguja roma de calibre 33 hecha a medida, en el soporte de la jeringa estereotáxica. A continuación, use una aguja biselada de calibre 30 para hacer una pequeña abertura superficial en cada uno de los DRG específicos para ayudar con la inserción de la aguja de inyección. Ajuste suavemente las coordenadas estereotáxicas para insertar la aguja de calibre 33 en el centro del DRG.

Idealmente, la aguja debe colocarse en el centro del DRG para garantizar una difusión uniforme de la solución inyectada en todo el DRG.

Una vez insertada la aguja, use la bomba de jeringa de infusión para inyectar 1 microlitro del virus en cada GRD. Durante la inyección, el DRG cambiará lentamente de color si la solución del virus contiene un tinte de color. No inserte demasiado la aguja, ya que esto puede hacer que el líquido se filtre por el lado ventral del DRG.

En caso de fuga durante la inyección, ajuste la posición de la aguja inmediatamente. Tres minutos después del final de la inyección, retire la aguja de inyección. Para realizar una lesión simultánea por aplastamiento de la raíz dorsal C5 a C8, aplaste cada raíz tres veces durante 10 segundos con un par de pinzas de punta fina. Oponerse completamente a los extremos de los fórceps. Debe aparecer una línea blanca en el tejido en el sitio del aplastamiento.