Evaluación de la integridad de la barrera hematoencefálica en un modelo de rata con lesiones cerebrales inducidas por láser
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:01 min. • April 28th, 2025
Tome una rata de control anestesiada y un modelo de rata con lesión cerebral inducida por láser.
La aplicación del láser en el hemisferio derecho dañó las células y la barrera hematoencefálica, o BBB, que separa la sangre del tejido cerebral.
Inyecte un tinte de seguimiento en la vena de la cola canulada que viaja a través de la circulación sistémica para llegar al cerebro.
El colorante se une a las proteínas plasmáticas y se filtra en el tejido cerebral a través de la BHE dañada.
Eutanasia a las ratas.
Perfunde las ratas a través del corazón para eliminar el tinte de la circulación.
Extraer y cortar el cerebro, aislar las rodajas del hemisferio lesionado y homogeneizarlas.
Tratar con una solución ácida para desnaturalizar las proteínas, liberando el colorante unido a la proteína.
Centrifugar y aislar el sobrenadante que contiene colorante. Agregue alcohol para mejorar la fluorescencia del tinte.
Transfiere la solución a una microplaca. Tras la excitación, una mayor intensidad de fluorescencia en el cerebro lesionado indica daño BBB inducido por láser.
Para evaluar la incidencia de rotura de la barrera hematoencefálica, 24 horas después de la lesión inducida por láser, cargue una jeringa c
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