Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:56 min. • April 28th, 2025
Comience con una sección de cerebro de primates no humanos químicamente fijada.
El fijador a base de aldehído reticula las proteínas, preservando la estructura del tejido, pero deja algunos residuos de aldehído reactivos.
Lave para eliminar la capa crioprotectora que rodea la sección de tejido.
Agregue un agente reductor para neutralizar los grupos aldehídos reactivos, produciendo subproductos de reacción.
Lavar para eliminar estos subproductos y el exceso de agentes reductores.
Aplique una solución de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos no específicos.
Agregue anticuerpos primarios dirigidos a una proteína expresada en sitios específicos de la membrana neuronal.
Lavar para eliminar los anticuerpos no unidos.
Agregue anticuerpos secundarios biotinilados dirigidos a los anticuerpos primarios.
Lavar para eliminar los anticuerpos no unidos.
Cubra con complejos de avidina-biotina-peroxidasa que se unen a los anticuerpos secundarios.
Lave nuevamente para eliminar los complejos no unidos.
Introducir un sustrato cromogénico junto con el agua oxigenada. En presencia de peróxido de hidrógeno, la enzima peroxidasa oxida el sustrato, formando precipitados marrones.
Comience transfiriendo secci
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