Tinción inmunohistoquímica de criosecciones de tejido coronal de rata para microglía y neuronas

Tome un portaobjetos que contenga criosecciones fijas y permeabilizadas de tejido coronal de rata.

Delinee las secciones con un bolígrafo hidrofóbico para crear un entorno de tinción controlado.

Transfiera las secciones a una cámara de humedad para evitar que los reactivos y el tejido se sequen durante los pasos posteriores.

Tratar las secciones con proteínas séricas para bloquear los sitios de unión no específicos.

Enjuague con tampón para eliminar el exceso de proteínas séricas.

Incubar con anticuerpos primarios dirigidos a proteínas específicas en la microglía y las neuronas.

Lavar con tampón para eliminar los anticuerpos primarios no unidos.

Incubar con anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos que se unen a los anticuerpos primarios.

Lavar con tampón para eliminar los anticuerpos secundarios no unidos. Luego, enjuague con agua doble destilada.

Aplique medios de montaje acuosos para proteger la señal fluorescente, coloque un cubreobjetos y séllelo.

Imágenes de las secciones bajo un microscopio de fluorescencia para visualizar la microglía y las neuronas inmunomarcadas.

Seque los bordes de las diapositivas y haga un borde repelente de líquidos alrededor del borde de la diapositiv