Tinción inmunohistoquímica de biomarcadores en secciones de la neurosfera de tumores cerebrales

Tome una diapositiva con secciones incluidas en parafina de neuroesferas de tumores cerebrales, grupos de células madre neurales que exhiben biomarcadores de proteínas nucleares específicos del tumor.

Calentar para derretir la parafina, retirarla con xileno y rehidratar el tejido con concentraciones de alcohol decrecientes.

Calentar en un tampón ácido que contenga detergente para desenmascarar los epítopos de los biomarcadores y permeabilizar las membranas celulares.

Enjuagar, luego tratar con un agente oxidante para inactivar las enzimas peroxidasas endógenas, evitando señales inespecíficas.

Aplicar una solución de bloqueo para enmascarar sitios de unión no específicos.

Incubar con anticuerpos primarios dirigidos a los epítopos de biomarcadores.

Enjuague, luego trate con anticuerpos secundarios conjugados con biotina que se unen a los anticuerpos primarios.

Enjuague e incube con una avidina conjugada con enzimas peroxidasas, que se une a la biotina.

Agregue un sustrato cromogénico y un agente oxidante.

Peroxidasa utiliza el agente para convertir el sustrato en precipitados coloreados, etiquetando la ubicación del biomarcador.

Contratiña los núcleos, deshidrata el tejido en alcohol y monta