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Neurociencia
0 vistas • 2:08 min • April 28th, 2025
Comience con una muestra de tejido cerebral, que no es transparente debido a la presencia de pigmentos y lípidos. Estos componentes causan dispersión de luz en neuronas marcadas con fluorescencia.
Incubar secuencialmente el tejido en soluciones con concentraciones crecientes de metanol para eliminar el agua y deshidratar el tejido gradualmente.
A continuación, trate este tejido con metanol concentrado para eliminar el agua residual, asegurando una deshidratación completa.
A continuación, transfiera el tejido a un disolvente de limpieza inicial que contenga diclorometano y metanol.
Incube agitando suavemente para permitir que el disolvente penetre profundamente en el tejido.
El diclorometano elimina los pigmentos y lípidos del tejido, reduciendo la dispersión de la luz y mejorando la transparencia.
Finalmente, transfiera el tejido al éter de dibencilo, un disolvente hidrofóbico e incube sin agitar.
El disolvente actúa como el agente de limpieza final que mejora aún más la transparencia del tejido.
Este proceso mejora la penetración de la luz, lo que permite una visualización más clara de las neuronas marcadas y sus conexiones en el tejido cerebral muestra.
Incube la muestra en serie en metanol al 20%, 40%, 60%, 80% y 100% durante una hora cada uno a temperatura ambiente. Luego, incube en metanol fresco al 100% durante la noche. Al día siguiente, incube la muestra en DCM al 66% recién preparado en metanol al 33% durante tres horas a temperatura ambiente con agitación. Después de tres horas, incube la muestra en éter de dibencilo sin agitar hasta que esté clara. Luego, guárdelo en éter de dibencilo hasta obtener imágenes.