Imágenes microscópicas electrónicas de transmisión de la endocitosis de vesículas sinápticas en neuronas del hipocampo de ratón

Comience tratando las neuronas del hipocampo de ratón con un tampón con alto contenido de potasio que contenga peroxidasa de rábano picante o HRP.

El potasio alto despolariza las neuronas presinápticas, desencadenando la exocitosis de las vesículas sinápticas. Luego, las neuronas recuperan las membranas de las vesículas sinápticas a través de la endocitosis, incorporando HRP en las vesículas recién formadas. Fije las neuronas con glutaraldehído y lávelas para eliminar el exceso de glutaraldehído.

Agregue peróxido de hidrógeno y un sustrato cromogénico, que es oxidado por HRP para formar precipitados densos en electrones. Lavar para eliminar cualquier sustrato sin reaccionar.

Tratar con tetróxido de osmio para mejorar el contraste de la membrana, luego lavar el exceso de reactivo. A continuación, agregue acetato de uranilo para mejorar el contraste de orgánulos.

Deshidratar las neuronas utilizando concentraciones crecientes de etanol e incrustarlas en resina.

Identifique microscópicamente las regiones densas en células y elimínelas. Luego, prepare secciones ultrafinas.

Transfiera una sección a una rejilla de cobre y contráñela con agentes de contraste.

Usando microscopía electrónica de tra