Microscopía de inmunofluorescencia de células neurales diferenciadas de células derivadas de sangre periférica

Tome un portaobjetos multicámara con cubreobjetos recubiertos de proteínas que contienen células neurales derivadas de la sangre periférica fijas y permeabilizadas, incluidas las células progenitoras neuronales, los astrocitos y las neuronas.

Añade una solución de bloqueo para bloquear sitios de unión no específicos.

Incubar con anticuerpos conjugados con colorantes fluorescentes que se unen a proteínas celulares específicas, lo que permite la identificación de tipos de células neuronales.

Lavar con tampón para eliminar los anticuerpos no unidos.

Incubar con un colorante nuclear fluorescente para teñir los núcleos.

Transfiera el cubreobjetos a una diapositiva con medios de montaje. Luego, coloque el portaobjetos preparado bajo un microscopio de fluorescencia equipado con filtros apropiados.

Usando longitudes de onda específicas de luz, excite los tintes fluorescentes, haciendo que emitan luz en longitudes de onda más largas.

Las señales fluorescentes emitidas corresponden a las proteínas celulares marcadas, destacando claramente los diferentes tipos de células neuronales y confirmando la diferenciación de las células sanguíneas reprogramadas.

Agregue una solución de bloqueo de PBS y BSA al 5%. Bloquee las celdas a temperatura ambiente en una placa basculante durante una hora. Preparar una dilución adecuada de anticuerpos en BSA PBS al 1% e incubar las células con los anticuerpos en una placa basculante durante 1,5 horas a temperatura ambiente. Lave las células tres veces con PBS durante cinco minutos por lavado. Incube las células con DAPI y monte los cubreobjetos con medios de montaje para su visualización en un microscopio.