Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:38 min. • April 28th, 2025
Comience con neuronas hipotalámicas primarias de ratón de tipo salvaje y knockout CCR5 cultivadas en cubreobjetos recubiertos de poli-D-lisina en una placa de pocillos múltiples.
Estas neuronas expresan el transportador de glucosa-4 marcado con proteína verde fluorescente (GFP-GLUT4) en el citoplasma.
Transfiera los cubreobjetos a portaobjetos de vidrio y limpie suavemente el exceso de medio para garantizar la estabilidad durante la adquisición de imágenes.
Coloque un portaobjetos en la platina del microscopio de deconvolución con el cubreobjetos hacia abajo.
Visualice las neuronas bajo iluminación de campo claro, luego trátelas con la quimiocina CCL5 e insulina secuencialmente.
Cambie a iluminación de fluorescencia para identificar las neuronas diana que expresan GFP-GLUT4 y ajuste los parámetros de imagen para capturar imágenes fluorescentes en vivo.
En las neuronas de tipo salvaje, la insulina y CCL5 se unen al receptor de insulina y CCR5, respectivamente, activando las vías de señalización aguas abajo que impulsan la translocación de la membrana GFP-GLUT4.
En las neuronas knockout de CCR5, CCL5 no se une, lo que resulta en una translocación reducida de GFP-GLUT4.
Capture las imágenes
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