Imágenes confocales del movimiento mitocondrial dentro de los oligodendrocitos en cultivos organotípicos de cortes de cerebro

Comience con una configuración de cámara de baño de microscopio confocal con una solución de imagen circulante y temperatura controlada.

Tome una membrana polimérica hidrófila que contenga una rebanada de cerebro de ratón organotípica en la que los oligodendrocitos se hayan transducido para expresar una proteína fluorescente roja específica de las mitocondrias y una proteína fluorescente verde específica del citosol.

La fluorescencia dual permite una visualización clara de la dinámica mitocondrial dentro del citosol del oligodendrocito.

Sumerja la rebanada en el centro de la bañera y asegúrela con un ancla de arpa.

Baja el objetivo y selecciona un oligodendrocito sano para escanear.

Ajuste la potencia del láser para minimizar la toxicidad celular y el fotoblanqueo.

Establezca los parámetros del microscopio y luego registre imágenes de lapso de tiempo de mitocondrias marcadas con fluorescencia.

Capture imágenes de pila z a diferentes profundidades para obtener una vista tridimensional de alta resolución de toda la celda.

Procese las imágenes para visualizar el movimiento mitocondrial dentro del oligodendrocito.

Use fórceps para transferir el confeti con la rebanada de la placa de Petri a l