Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:54 min. • April 28th, 2025
Comience con secciones del cerebro del ratón que exponen el hipocampo dorsal, rico en neuronas.
Agregue peróxido de hidrógeno para apagar la actividad de la peroxidasa neuronal, seguido de lavado.
Tratar con un tampón de permeabilización, luego aplicar un tampón de bloqueo para bloquear la unión no específica.
Agregue los anticuerpos primarios e incube con agitación. Estos anticuerpos se unen a proteínas marcadoras de activación neuronal.
Lavar y aplicar anticuerpos secundarios conjugados con biotina para unirse a los anticuerpos primarios.
Enjuagar e introducir un complejo avidina-biotina-peroxidasa que se una a la biotina en los conjugados.
Lavar de nuevo, luego agregar un sustrato cromogénico, que es oxidado por la peroxidasa para generar un precipitado marrón. Detenga la reacción con PBS.
Transfiera las secciones a un portaobjetos recubierto de gelatina y deshidrate utilizando concentraciones crecientes de etanol. Luego, limpie las secciones en xileno y móntelas.
Coloque el portaobjetos bajo un microscopio de campo claro.
Bajo la iluminación de la luz, las regiones no teñidas transmiten luz y parecen brillantes, mientras que las neuronas teñidas absorben y reflejan la luz y parecen
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