Imágenes in vivo de dos fotones de la retina del ratón

Tome un ratón transgénico anestesiado con la cabeza asegurada en ángulo sobre un soporte para obtener imágenes in vivo de la retina del ratón.

La retina contiene células ganglionares de la retina, o RGC, que expresan una proteína marcada con fluoróforos.

Aplicar lubricante ocular y montar un cubreobjetos sobre el ojo.

Bajo un microscopio, ilumine uniformemente la retina para excitar las proteínas fluorescentes en las RGC.

Utilizando la fluorescencia emitida, obtenga una vista de campo amplio de las RGC del plano focal y las RGC desenfocadas.

Cambie al modo de imagen de dos fotones, enfocando la luz infrarroja cercana de baja energía en la capa RGC.

En el punto focal, la energía combinada de dos fotones excita el fluoróforo, que luego libera energía en forma de fluorescencia.

Como la excitación se limita a un solo punto, se minimiza la fluorescencia de otros planos focales.

Capture imágenes en múltiples planos focales a lo largo del eje z para obtener imágenes de toda la capa RGC.

Aplique gotas lubricantes para los ojos en ambos ojos del ratón. Gire el brazo principal del soporte de la cabeza hasta que la pupila de un ojo esté orientada en línea con la trayectoria de la luz y coloque un c