Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:04 min. • May 29th, 2025
Comience con cortes de tejido cerebral prefijados recolectados de etapas postnatales tempranas y tardías de ratones.
El corte contiene neuronas granulares cerebelosas, o CGN, que expresan una proteína fluorescente.
Con un microscopio confocal, concéntrese en un solo CGN fluorescente.
Capture imágenes de pila z a diferentes profundidades para crear una vista tridimensional de la neurona.
Usando software de imágenes, rastree las neuritas de las neuronas o proyecciones largas, incluidas las dendritas y los axones.
Mida la longitud de la dendrita desde el cuerpo celular hasta su punta.
Analizar la formación de garras dendríticas, estructuras especializadas en las puntas de las dendritas donde se reciben señales de otras neuronas.
Además, evalúe el área de superficie y el volumen de la neurona.
En la etapa postnatal temprana, las neuronas muestran un mayor número de dendritas, sin formación de garras.
Mientras tanto, en la etapa postnatal tardía, hay menos dendritas, pero su longitud y el número de garras aumentan.
Por lo tanto, con la edad, las CGN experimentan sinaptogénesis y forman conexiones con otras células para la transmisión de señales.
Para estudiar la morfología de CGN electroporados individuales de secciones cerebrales sagitales del cachorro experimental, tome imágenes de pila z a 0,5 micrómetros por pila en un microscopio confocal. Imagen de una celda por ventana de imagen para permitir un fácil análisis de imágenes y reconstrucción 3D. Analice la longitud de las neuritas y la formación de garras dendríticas de forma ciega utilizando un trazador de neuritas simple.
Cargue imágenes de pila de un solo canal de CGN electroporados en Fiji y haga clic en Plugins, Segmentación y Simple Neurite Tracer. Seleccione Crear nuevo visor 3D en el menú desplegable. Desplácese hasta la base de una dendrita que se conecta al soma celular y comience un baño haciendo clic en la unión. Trace manualmente la ruta haciendo clic en las secciones donde la señal de relleno de celda es más brillante y presionando Y para mantener el seguimiento.
Trace hasta el final de la dendrita y confirme el camino presionando F. Alternativamente, trace hasta la base de la garra. A continuación, traza la garra desde la base de la estructura hasta el final de la neurita más larga. Rastree las ramas secundarias y terciarias manteniendo presionada la tecla Control en Windows o Alt en un Mac OS y haciendo clic en la ruta. Confirme la ruta pulsando F. Observe que las mediciones de las trazas son visibles en una ventana independiente. Sume todos los tamaños de las ramas de las garras para obtener la longitud total de cada garra.