Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:36 min. • May 29th, 2025
Tomemos un ratón transgénico anestesiado que expresa proteínas fluorescentes en neuronas piramidales dispersas.
Al ratón se le implanta una cánula de imágenes sobre el hipocampo dorsal.
Coloque el mouse debajo del microscopio de dos fotones en una almohadilla térmica, asegurando la placa de la cabeza de la cánula al soporte para inmovilizar su cabeza.
Aplique ungüento para evitar el secado de la córnea.
Limpie la cánula con agua desionizada e inspecciónela bajo un objetivo de bajo aumento para verificar si hay desechos, daños o problemas de fluorescencia.
Alinee la cánula de imágenes con el eje óptico del microscopio para obtener imágenes precisas.
Luego, cambie a un objetivo de alta resolución de inmersión en agua.
Llene la cánula con agua desionizada, asegurándose de que no haya burbujas de aire para evitar la distorsión de la imagen.
Realice imágenes longitudinales de dos fotones utilizando luz infrarroja para excitar selectivamente los fluoróforos en el plano focal, lo que permite obtener imágenes de tejidos profundos.
La cánula implantada facilita el acceso repetido al hipocampo dorsal para rastrear los cambios dendríticos a lo largo del tiempo.
Coloque el mouse bajo el microscopio sobre la alfombra calefactora y asegure la placa de la cabeza al soporte. Aplique ungüento para los ojos del animal. Luego, limpie la cánula de imágenes con una jeringa y una aguja delgada para dejar caer agua desionizada en la cánula, seguido de retirarla con una bomba de vacío.
Utilice objetivos de bajo aumento y larga distancia de trabajo para verificar visualmente la cánula en busca de agua residual, suciedad, integridad y presencia de fluorescencia. Luego alinee la cánula con el eje óptico ajustando los ángulos de los brazos del soporte de la cabeza.
Cambie a un objetivo de 25x con una apertura numérica de 1.0 y una distancia de trabajo de 4 milímetros. Luego agregue suficiente agua desionizada a la cánula para llenarla y mantener el exceso de agua encima de la cánula. Finalmente, use dos excitaciones de fotones y obtenga imágenes de las señales fluorescentes.