Investigación de los orígenes de las neuronas sensoriales en la duramadre mediante microscopía de fluorescencia

Tomemos una rata anestesiada con un cráneo expuesto que está cubierto con una cortina.

Taladre un agujero para exponer la duramadre, la capa más externa del cerebro, inervada por neuronas sensoriales sensibles al dolor que se originan en el ganglio del trigémino y los ganglios de la raíz dorsal cervical.

Construya una barrera para evitar fugas, introduzca un trazador retrógrado y selle el orificio.

Sutura la herida y deja que la rata se recupere.

El marcador ingresa a los axones neuronales sensoriales, viaja retrógradamente a sus ganglios y ingresa a los cuerpos celulares neuronales.

Eutanasia a la rata y disecciona los ganglios.

Prepare secciones de los ganglios y móntelas en portaobjetos.

Agregue una solución para permeabilizar las membranas celulares y enmascarar los sitios de unión no específicos.

Incubar con anticuerpos primarios dirigidos al marcador y a los neuropéptidos específicos de las neuronas sensoriales.

Agregue anticuerpos secundarios marcados con fluorescencia específicos para los anticuerpos primarios.

Mediante microscopía de fluorescencia, observe la colocalización de neuropéptidos y trazadores dentro de los cuerpos celulares, confirmando el origen ganglionar de las neuron