Incrustación del cerebro de Drosophila en una matriz para obtener imágenes de lapso de tiempo de las neuronas del reloj circadiano

Comience con una tapa de placa de Petri que contenga el cerebro larvario de Drosophila, preexpuesto a un ciclo de luz / oscuridad. La rebanada contiene neuronas de reloj que expresan proteínas fluorescentes.

Agregue un medio rico en nutrientes con antibióticos para apoyar la supervivencia neuronal y una solución tibia de fibrinógeno.

Mezcle suavemente la solución para distribuir el fibrinógeno de manera uniforme.

Coloque una pequeña cantidad de esta mezcla en el cubreobjetos de un plato con fondo de vidrio.

Agregue trombina para reaccionar con el fibrinógeno e inducir la formación de una matriz de fibrina tridimensional.

Transfiera el cerebro a esta matriz, colocándolo en la parte anterior hacia abajo para alinear las neuronas del reloj para la obtención de imágenes.

Dobla la matriz sobre el cerebro para anclarla y prevenir el movimiento.

Agregue un medio rico en nutrientes para inactivar la actividad de la trombina.

Selle el plato con una membrana permeable al gas para mantener la hidratación y la viabilidad neuronal.

Realice imágenes de fluorescencia de lapso de tiempo a intervalos específicos.

Los cambios de fluorescencia en las neuronas del reloj revelan su activación e inhibici