Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:53 min. • May 29th, 2025
Tome un cubreobjetos con un cultivo de neuronas ventrales del mesencéfalo derivadas de embriones de ratón.
Las células se infectan con un vector viral para expresar un indicador de calcio.
Transfiera el cubreobjetos a la cámara de grabación de un microscopio confocal perfundido con un tampón de grabación.
Usando luz visible, identifique una región que contenga múltiples neuronas, luego cambie a imágenes de fluorescencia.
A niveles bajos de calcio intracelular, el indicador permanece libre y exhibe una baja intensidad de fluorescencia.
Las propiedades intrínsecas de las neuronas generan potenciales de acción espontáneos, lo que hace que los canales de calcio dependientes de voltaje se abran y permitan la entrada de calcio.
El exceso de calcio se une al indicador, induciendo un cambio conformacional que aumenta la intensidad de la fluorescencia.
Registre la intensidad de la fluorescencia a lo largo del tiempo para rastrear la actividad espontánea del calcio.
Introducir un neurotransmisor a alta concentración, que se une a los receptores de las neuronas, generando potenciales de acción continuos.
La activación sostenida del canal de calcio dependiente de voltaje prolonga la entrada de calcio,
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