Imágenes de calcio in vitro en cultivos de hipocampo de rata a corto y largo plazo
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:41 min. • May 29th, 2025
Tomemos un cultivo neuronal del hipocampo de rata a corto plazo que representa neuronas jóvenes y un cultivo a largo plazo que representa neuronas envejecidas.
Las neuronas envejecidas exhiben una mayor densidad de canales de calcio dependientes de voltaje de tipo L, o L-VGCC, que permanecen abiertos durante más tiempo tras la despolarización de la membrana.
Incube con un indicador de calcio fluorescente que se difunda en las células, luego lávese para eliminar cualquier exceso de tinte.
Coloque los cultivos en una cámara de perfusión bajo un microscopio de fluorescencia.
Introducir una solución que contenga neurotransmisores que se unan a los receptores de las neuronas, induciendo la afluencia de iones de sodio y desencadenando la despolarización de la membrana.
La despolarización activa los L-VGCC, lo que permite la entrada de calcio en el citoplasma.
En el cultivo a largo plazo, la mayor densidad y la apertura prolongada de L-VGCC conducen a una sobrecarga de calcio, un sello distintivo del envejecimiento neuronal.
La unión del calcio al indicador genera fluorescencia, y las neuronas envejecidas exhiben una mayor intensidad de fluorescencia, lo que refleja un aumento de los niveles de
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