Obtención de imágenes de las placas de beta amiloide en secciones de tejido cerebral mediante inmunomarcaje y tinción de curcumina

0 vistas3:14 min • May 29th, 2025

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Comience con secciones cerebrales de un modelo de ratón neurodegenerativo.

Incube con una solución de bloqueo suplementada con detergente para aumentar la permeabilidad del tejido y bloquear la unión no específica. Deseche la solución.

Introducir anticuerpos primarios dirigidos a las placas de beta amiloide. Incubar con agitación para que los anticuerpos interactúen con las placas de beta amiloide, luego lavar.

Agregue anticuerpos secundarios marcados con fluoróforo rojo e incube en la oscuridad para permitir que los anticuerpos interactúen.

Lavar para eliminar los anticuerpos no unidos, seguido de un lavado con alcohol.

Agregue curcumina, que se une a los amiloides ricos en láminas beta con alta afinidad, luego lave.

A continuación, trate con concentraciones crecientes de alcohol, deshidratando las secciones del cerebro. Agregue xileno para eliminar cualquier rastro de reactivos.

Monte una sección en un portaobjetos y observe bajo un microscopio de fluorescencia.

Use un láser de longitud de onda de 590 nanómetros para excitar los fluoróforos rojos en los anticuerpos secundarios. Captura la imagen.

Cambie a un láser de longitud de onda de 480 nanómetros para excitar la curcumina, emitiendo fluorescencia verde.

Superponga las imágenes; la colocalización de fluorescencia roja y verde confirma la placa beta-amiloide en el tejido cerebral.

Para el etiquetado de muestras seccionadas con criostato con anticuerpos beta anti-A, lave las muestras tres veces con PBS fresco por lavado en pocillos individuales de una placa de 12 pocillos antes de bloquear cualquier unión inespecífica con suero de cabra normal al 10% en PBS y Triton x-100 al 0,5% durante una hora a temperatura ambiente.

Al final de la incubación, deseche la solución de bloqueo e incube las muestras con un anticuerpo beta específico durante la noche a 4 grados centígrados y 150 rotaciones por minuto. A la mañana siguiente, lave las secciones con tres lavados de 10 minutos en PBS fresco por lavado seguido de incubación con un anticuerpo secundario apropiado conjugado con un fluoróforo rojo durante una hora a temperatura ambiente protegido de la luz.

Al final de la incubación, lave las secciones tres veces con PBS seguido de un lavado con alcohol al 70%. Después del lavado con alcohol, incube las secciones con 10 curcumina micromolar durante 10 minutos a temperatura ambiente seguido de tres lavados con alcohol al 70% de un minuto.

Después del último lavado, deshidrate las secciones con alcohol al 90% y al 100% durante un minuto por concentración, y limpie las secciones dos veces durante cinco minutos por inmersión con xileno fresco por incubación. Luego monte e imagine las secciones como se demuestra.

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Imagen tejidos amiloides manchado con Oligothiophenes conjugado luminiscente por hiperespectral Confocal la microscopia y la proyección de imagen de toda la vida de la fluorescencia

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Última actualización: 1 agosto 2026