Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 6:41 min. • May 29th, 2025
Tome una sección cerebral gruesa fija de un ratón infectado con el virus de la rabia.
El virus infecta las neuronas y se replica, lo que da como resultado proteínas virales presentes dentro de las células.
Tratar con un detergente para permeabilizar las membranas celulares y una solución bloqueadora para enmascarar los sitios de unión no específicos.
Incubar con anticuerpos primarios dirigidos a las proteínas virales, seguidos de anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos que se unen a los anticuerpos primarios.
Tratar con un tinte fluorescente de unión a ácidos nucleicos para etiquetar el núcleo.
Deshidrate el tejido en concentraciones crecientes de alcohol, luego aplique una solución aclarante para aumentar la transparencia del tejido para obtener imágenes.
Monte la sección en una cámara de imágenes, llénela con la solución aclarante y séllela.
Usando microscopía de barrido láser confocal, obtenga imágenes del tejido por separado usando las etiquetas fluorescentes, luego combínelas para crear una imagen bidimensional.
Adquiera imágenes en diferentes planos focales en el tejido y combínelas para generar una representación tridimensional para evaluar la progresión de la infección.
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