Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 4:38 min. • May 29th, 2025
Tome células aisladas de los nervios ciáticos y los ganglios de la raíz dorsal de ratón o DRG.
Incube con anticuerpos marcados con fluoróforo contra CD45 y CD11b, y con anticuerpos marcados con biotina contra MHC clase II, para marcar las células inmunitarias.
Incubar con estreptavidina marcada con fluoróforo que se une a la biotina.
Tratar con un fijador para estabilizar la estructura celular.
Introduzca un tampón de permeabilización con una tinción de ADN fluorescente para permeabilizar las membranas y etiquetar los núcleos.
Usando un citómetro de flujo, pase las células a través del rayo láser para evaluar las características ópticas y de fluorescencia.
Elimine los agregados con una mayor fluorescencia de ADN para aislar células individuales y detectar la fluorescencia de los marcadores.
Identificar células que expresan CD45, un marcador característico de las células inmunitarias, confirmando su presencia.
La mayoría de las células CD45 positivas en el DRG expresan CD11b y MHC clase II, lo que indica células similares a la microglía, que están ausentes en los nervios ciáticos.
Esta técnica complementa las imágenes para analizar la heterogeneidad de las células inmunitarias dentro de los
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