Obtención de imágenes in vivo de la retina del ratón mediante tomografía de coherencia óptica

Tome un ratón genéticamente modificado anestesiado que exhiba atrofia óptica.

Las pupilas están dilatadas para mejorar la penetración de la luz.

Administrar anestesia para inmovilizar los ojos. Aplicar gotas para la hidratación de la córnea. Luego, envuelva el ratón en una gasa para mantener el calor corporal.

Aplique gel para minimizar la refracción de la luz. Asegure el mouse en el casete del sistema de tomografía de coherencia óptica de dominio espectral, asegurando el posicionamiento adecuado de la cabeza.

Alinee los ejes ópticos del ojo derecho y la lente de imagen. Utilice controles de alineación para centrar la cabeza del nervio óptico en el campo de imágenes, asegurando una alineación adecuada de la retina.

La luz de baja coherencia dirigida a la retina se refleja en capas con diferentes índices de refracción. La luz reflejada se combina con un haz de referencia para generar patrones de interferencia, creando una imagen transversal de alta resolución de la retina.

Después de la imagen, permita que el ratón se recupere.

El análisis de la imagen OCT revela el engrosamiento de la capa compleja de células ganglionares, un sello distintivo de la atrofia óptica.

Retire las gotas y repita la instalación de fenilefrina al 10% y tropicamida al 0,5%. Cuando los ojos estén lo suficientemente dilatados para la imagen, lubrique los ojos con gotas oculares a base de glicol viscoso para proporcionar hidratación corneal y envuelva al ratón en una gasa quirúrgica para mantenerlo caliente.

Con una esponja o una mecha de algodón, aplique una capa delgada de gel oftálmico complementado con hipromelosa al 0,3% en cada ojo. Mientras lo haces, deja las pestañas y los bigotes a un lado. Coloque el mouse en el casete con la cabeza recta y apuntando hacia adelante, y coloque con cuidado la barra de mordida en su boca. Coloque un rollo de algodón debajo del costado del animal para el ojo que se está examinando.

Luego, manteniendo la punta de puntería con clip en la lente específica del mouse, gire el tornillo traductor Z en sentido antihorario para llevar la lente hacia el ojo. Preestablezca la posición del mouse girando y girando el casete y girando la barra de mordida y los tornillos del traductor X hasta que el ojo experimental se posicione para mirar directamente a la lente.

Cuando los ejes ópticos de los ojos y el cristalino estén alineados, seleccione la primera exploración del examen. Haga clic en Comenzar a apuntar y use el tornillo traductor Z para mover la retina verticalmente en el panel izquierdo y horizontalmente en el panel derecho. Al girar el casete, mueva la cabeza del nervio óptico hacia arriba o hacia abajo para llevarla al centro del panel derecho. Use el tornillo de la barra de mordida para enderezar la retina dentro del panel derecho y gire el casete para colocar la cabeza del nervio óptico en el medio del panel izquierdo.

Luego, use el tornillo X-translator para nivelar la retina dentro del panel izquierdo y, teniendo en cuenta la función principal de cada modulador, ajuste aún más la posición de la retina para una centralización perfecta en la cabeza del nervio óptico. Cuando la retina esté en posición, haga clic en Iniciar instantánea para comenzar la tomografía de coherencia óptica de dominio espectral.

No olvide guardar el escaneo y el informe. Ajuste la centralización si es necesario. Retire el mouse del casete. Aplique gel oftálmico con hipromelosa al 0,3% en cada ojo y coloque el ratón en una placa calefactora con monitoreo hasta su recuperación completa.