Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 2:59 min. • May 29th, 2025
Tome un inserto de membrana que contiene cortes de cerebro organotípicos embrionarios de ratón transducidos, donde las neuronas y las células gliales radiales expresan proteínas fluorescentes, lo que permite su visualización.
Usando microscopía de fluorescencia, seleccione un corte con neuronas corticales fluorescentes que migren radialmente hacia la superficie pial del corte utilizando andamios gliales radiales intactos.
Transfiera el inserto de membrana con la rebanada seleccionada a un plato con fondo de vidrio con medios para apoyar la actividad celular durante la obtención de imágenes.
Coloque el plato en la cámara climatizada del microscopio confocal invertido para garantizar la viabilidad celular.
Ajuste los parámetros de imagen para capturar imágenes claras y minimizar el fotodaño.
A continuación, configure una pila Z en la región de destino para visualizar las estructuras celulares.
Inicie imágenes de lapso de tiempo a intervalos regulares.
Analice las imágenes para evaluar la migración radial de las neuronas corticales desde la zona subventricular hacia la placa cortical a lo largo de los andamios gliales radiales, destacando los patrones de migración neuronal.
Seleccione un corte de cerebro para obtener imágenes viendo los cortes a través de un microscopio invertido. Elija una rebanada con neuronas individuales brillantes en la SVZ superior, migrando radialmente hacia la superficie pial de la rebanada.
La presencia de finos procesos fluorescentes de células gliales radiales que abarcan toda la placa cortical indica un andamio glial radial intacto, que es utilizado por las neuronas corticales migratorias.
Transfiera el inserto de membrana con una rebanada seleccionada a un plato con fondo de vidrio de 50 milímetros de diámetro que contenga 2 mililitros de medio de cultivo en rodajas. Coloque el plato en la cámara climática del microscopio confocal.
Establezca la resolución en 512 por 512 píxeles. Aumente la velocidad de escaneo de 400 hercios a 700 hercios para aumentar la velocidad de fotogramas de aproximadamente 1,4 a aproximadamente 2,5 fotogramas por segundo. No use más de dos veces el promedio.
Defina una pila Z a través de la región electroporada con un tamaño de paso de 1,5 micras. Comience la serie de lapso de tiempo tomando una pila Z cada 30 minutos. Los ajustes descritos permiten una resolución y un brillo suficientes de la imagen mientras se mantiene bajo el daño por fotodaño durante la adquisición.