Visualización y mapeo de placas de amiloide marcadas con metoxi-X04 en una sección de cerebro de ratón con enfermedad de Alzheimer

0 vistas3:19 min • May 29th, 2025

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Comience con una sección de tejido cerebral de ratón que contenga la región de interés en un tampón para mantener la hidratación durante la obtención de imágenes.

El tejido se obtiene de un modelo de ratón con enfermedad de Alzheimer inyectado con metoxi X04, un tinte fluorescente.

Methoxy X04 se une específicamente a estructuras de láminas plisadas en β en placas amiloides y conserva su fluorescencia para imágenes y análisis.

Usando un microscopio fluorescente con un filtro UV, excite el metoxi-X04 y capture la fluorescencia emitida para visualizar placas amiloides marcadas con fluorescencia contra el tejido circundante.

Sin ajustar la platina del microscopio, capture imágenes de la misma región en modo de campo claro para detallar la estructura del tejido y en modo de fluorescencia para visualizar las placas.

Alinee las imágenes de campo claro y fluorescentes utilizando un software de procesamiento de imágenes para mapear con precisión las placas en las estructuras anatómicas.

Estas imágenes proporcionan una visualización detallada de las placas amiloides dentro de su contexto estructural para estudiar la patología de la enfermedad de Alzheimer.

Con la ayuda de un atlas estereotáxico del cerebro de ratón, seleccione secciones cerebrales que contengan la región de interés y coloque cada sección en crioprotector en un pocillo de una placa de cultivo de 24 pocillos. A continuación, use una pipeta desechable para agregar una gota de PBS en un portaobjetos de microscopio y luego coloque la sección en la gota.

Examine la sección bajo un microscopio fluorescente para identificar regiones que contengan placas A-beta marcadas con metoxi-X04. Sin mover la platina del microscopio, capture imágenes de las regiones de interés tanto en campo claro como en modo de fluorescencia. Cada imagen debe mostrar la misma región en ambos campos para correlacionar la placa con la región estructural de la sección de tejido.

Guarde y asigne un nombre a las imágenes tomadas de acuerdo con el número de animal. Además, registre el número de pozo en la placa y el campo de las imágenes tomadas. Vuelva a colocar la sección en el pocillo designado una vez que se complete la imagen. Examine la siguiente sección de la secuencia utilizando el mismo procedimiento para evitar que se sequen las secciones.

Para alinear las imágenes, abra las imágenes de campo claro y campo UV para obtener el mismo ROI en la imagen J. Luego, use el complemento J de mosaico para alinear los bordes de las dos imágenes. Guarde la imagen alineada y combinada de acuerdo con el número de pozo en una carpeta, con el número del animal en particular. Combine las imágenes de diferentes secciones del mismo animal para identificar y localizar las placas en la región de interés.

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Última actualización: 1 agosto 2026