¿Qué son los polisomas?

Los polisomas son complejos formados por múltiples ribosomas que traducen una sola cadena de ARNm.

¿Por qué usar microscopía de fuerza atómica para obtener imágenes?

AFM proporciona resolución nanométrica, permitiendo la visualización detallada de estructuras biológicas.

¿Cuál es la importancia de obtener imágenes de polisomas?

Obtener imágenes de polisomas ayuda a comprender los mecanismos de síntesis y regulación de proteínas.

¿Cómo se preparan las muestras para AFM?

Las muestras se preparan adhiriendo polisomas a láminas de mica y asegurándolos para la imagen.

¿Qué parámetros de imagen son importantes en este estudio?

Los parámetros clave incluyen el área de escaneo, la resolución y la configuración de la escala Z para una imagen óptima.

Obtención de imágenes de polisomas aislados del cerebro de un ratón mediante microscopía de fuerza atómica

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:28 min • May 29th, 2025

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Comience con una hoja de mica con polisomas adheridos aislados del tejido cerebral del ratón.

Un polisoma es un complejo de múltiples ribosomas unidos a una cadena de ARN.

Con cinta adhesiva, asegure la hoja de mica al soporte de muestras.

Coloque el portamuestras en la platina del microscopio de fuerza atómica.

Coloque el voladizo premontado. Alinee el láser y el detector para garantizar una detección precisa de la señal durante la obtención de imágenes.

Ajuste la frecuencia de oscilación del voladizo para optimizar la detección de características de la superficie y preservar la integridad de la muestra.

Comience a obtener imágenes haciendo oscilar la punta en voladizo sobre la superficie de la muestra. A

medida que la punta se encuentra con una superficie elevada del polisoma, el láser se desvía.

Estas desviaciones del láser son capturadas por el detector, que genera una imagen con resolución a nanoescala.

Utilice el software adecuado para corregir los efectos arbitrarios de inclinación y deriva, lo que permite la visualización del polisoma.

Fije la muestra preparada al soporte de muestras del AFM con cinta adhesiva de doble cara. A continuación, inserte el portamuestras en la etapa de AFM de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Después de la calibración, acérquese a la muestra hasta que la punta en voladizo encaje con la superficie.

Seleccione un área de escaneo de 2 por 2 micras, una resolución de al menos 512 por 512 píxeles. Elija el modo de sustracción de fondo en vivo y seleccione una escala Z de 20 a 25 nanómetros. Luego, comience la adquisición de imágenes. Inspeccione la imagen, buscando la presencia de objetos redondos caracterizados por una altura entre 10 y 15 nanómetros al adquirir imágenes en el aire.

A continuación, ajuste el punto de ajuste y los parámetros de retroalimentación hasta que se visualicen objetos afilados. El fondo debe parecer relativamente plano en buenas muestras con objetos de 2 a 4 nanómetros de altura. Una vez que la imagen se vea bien, adquiera varios escaneos de 2 por 2 micras en diferentes áreas de muestra.